“既然常規的方法不行,那就換個思路。”
“不用裂解法,改用競爭結合法。”
“找一個能跟這段序列特異性結合的配體,把它從宿主基因組裡釣出來,再換高鹽或者低pH條件把配體洗掉,讓目標序列自己釋放。”
“配體可以用金屬親和層析柱,鎳柱或者鈷柱,選能跟磷酸骨架配位的過渡金屬離子。”
羅清華眼睛一亮:“您是說,用金屬親和色譜?”
“對,而且不用一次洗脫,要做梯度。”
“先用低濃度咪唑把非特異性結合的蛋白和核酸沖掉,再用高濃度咪唑梯度洗脫。”
“這段序列如果真有這麼高的活性,它的構象應該很特殊,跟金屬離子的結合強度會跟常規DNA拉開差距。”
戰清在旁邊聽了,直接擼起了袖子。
“我來,我手穩,微量操作比你們年輕人準。”
老先生幹這行五十多年了,對這些實驗流程爛熟於心,哪怕七十多了手也穩得很,在場的人裡還真沒誰敢說能做得比老先生好,也就沒敢搶這來之不易的實驗機會。
說幹就幹,老先生轉身就去準備層析柱和緩衝液。
羅清華趕緊招呼幾個學生打下手,配試劑的配試劑,裝柱的裝柱。
肖宿站在戰清旁邊,眼睛盯著老先生的操作,偶爾出聲提醒一句。
“尿素濃度可以再高一點,八摩爾每升試試”
“去垢劑的濃度梯度設三個點,零點五、一、二,看看哪個效果最好”。
戰清裝柱的手法確實漂亮,一根1毫升的微量層析柱,填料裝得勻勻的,液麵平得像鏡面,梯度洗脫的流速控制在每分鐘零點二毫升,一滴一滴往下走。
實驗整整進行了三個多小時,收集管裡終於開始出峰了。
第一個洗脫峰,常規DNA和蛋白混合物,沒訊號。
第二個洗脫峰,戰清加到了五十毫摩爾,收集管裡的液體一進檢測孔,熒光訊號直接跳起來了,讀數穩穩地往上走。
羅清華盯著螢幕,聲音都有點變調:“出來了……活性單位比剛才高了兩百多倍,這還只是粗提啊。”
戰清又把咪唑濃度提到了兩百毫摩爾,第三個峰出來的時候,所有人都圍了過去。
檢測孔裡的熒光訊號強得幾乎要飽和,戰清稀釋了一百倍重新測,讀數還是頂格。
“純度百分之九十二以上。”羅清華念出資料,聲音都有些發抖。
肖宿湊過去看了一眼圖譜,忽然停住了。
他指著第二組資料裡一個不起眼的小峰說道:“你們看這個伴生峰,它的洗脫時間和主峰高度相關,主峰出來它就出來,主峰沒了它就沒了。”
羅清華把圖譜放大,看了幾秒,倒吸了一口氣:“這……這是兩個不同的調控域?”
“不止如此。”
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